9α-羟基雄烯二酮（9α-OH-AD）是甾体激素药物合成的重要中间体，常用于各种激素类药物的合成。微生物细胞内的 3-甾酮-9α- 羟化酶（KSH）是将雄甾-4-烯-3, 17-二酮（4AD）转化为 9α-OH-AD 的关键酶。本研究采用分子生物学相关技术，优化 PCR 反应体系中 的助剂浓度，从简单节杆菌的基因组中克隆获得 KSH 基因并构建重组质粒，随后将该质粒转化入酿酒酵母中构建基因工程菌。底物投料后， TLC 检测结果表明转入 KSH 基因的酿酒酵母工程菌可以将 4AD 转化为 9α-OH-AD。本研究所克隆的 KSH 具有将 4AD 转化为 9α-OH-AD 的生物学活性，后续可在此基础上对该酶的活性改造展开研究，为该酶在甾体制药工业中的应用奠定了基础。