目的 优化商用游离葡萄糖异构酶催化葡萄糖制备果葡糖的反应条件，弥补现有研究中多因素协同作用探究的缺口，提升该酶的工业应用价值。方法 以果葡糖转化率和酶比活力为评价指标，采用单因素试验考察温度、pH、葡萄糖浓度及酶添加量的影响，选取 3 个关键因素采用 L9 (33)正交试验筛选最优条件；通过 HPLC 法定量测定果葡糖含量。结果 果葡糖质量浓度在 2.00~10.00g/L 范围内线性关系良好（R2=0.9998）；最优反应条件为温度 55℃、pH7.5、葡萄糖 150g/L、酶添加量 3g/L，此时转化率为 49.62±0.85%，酶比活力为 268.35±4.12U/g，两项指标 RSD 均＜2.00%；方差分析显示，温度、pH 影响极显著（P<0.01），葡萄糖浓度影响显著（P<0.05）。结论 本研究建立的检测方法可靠，筛选的最优反应条件重复性与稳定性良好，明确了各因素对催化性能的影响规律，为果葡糖工业化高效生产提供了实验依据。